Phương pháp đo aflatoxin ngô
Aflatoxin, viết tắt là AFT trong tiếng Anh, là một hợp chất bao gồm một vòng difuranyl và coumarin (oxanaphthoquinone).,với trọng lượng phân tử 312-346 và điểm nóng chảy 200-300 °C. Nó có tính chất ổn định và chống nhiệt độ cao và có thể tạo ra huỳnh quang dưới ánh sáng cực tím sóng dài.Nó được chia thành B1, B2, G1, G2, M1, M2, P1, R1, GM, và rượu độc hại theo màu sắc huỳnh quang khác nhau, giá trị RF và cấu trúc.
AFT không hòa tan trong nước, ethane, ether và ether dầu mỏ, nhưng dễ dàng hòa tan trong các dung môi hữu cơ như methanol, ethanol, chloroform, acetonitrile và dimethylformamide.AFT có thể phân hủy nhẹ trong các dung môi axit với độ pH 1-3, phân hủy và phân hủy nhanh chóng trong các dung dịch có pH 9-10, phân hủy nhanh khi tiếp xúc với kiềm và phân hủy thành muối gần như không độc hại trong các dung dịch kiềm với pH 9-10.Nó có thể được giảm trong điều kiện axit.
Mục tiêu của thí nghiệm
Aflatoxin đề cập đến một số chất gây ung thư độc hại cao được sản xuất bởi nấm.các triệu chứng rối loạn chức năng gan phổ biến như sốtTiếp xúc lâu dài với liều thấp (20 microgram / kg trọng lượng cơ thể) có thể làm tăng đáng kể nguy cơ ung thư gan, ung thư dạ dày và các bệnh khác.Vì nó có mặt rộng rãi trong cây trồng và thực phẩm và gây hại lớn cho con người và động vật, thiết lập các phương pháp phát hiện nhanh chóng và chính xác là rất quan trọng để đảm bảo an toàn thực phẩm và sức khỏe cộng đồng.
Mục đích của thí nghiệm này là sử dụng nguyên tắc phân tích miễn dịch hấp thụ liên kết enzym pha rắn (ELISA), cụ thể là phân tích miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme (ELISA),để hạn chế và định lượng hàm lượng aflatoxin B1 trong các mẫu, cung cấp cơ sở khoa học cho việc đánh giá rủi ro ô nhiễm thực phẩm.
Thiết bị thí nghiệm
1 Máy phân tích mycotoxin ST-2000A
2 Ngô, homogenizer, thiết bị làm khô nitơ, dao động, ly tâm, pipette cấp, cân bằng (sự nhạy 0,01g), micropipette, methanol, n-hexane, chloroform hoặc dichloromethane phản ứng
Phương pháp thử nghiệm
1 Kiểm tra thiết bị được sử dụng trong thí nghiệm để đảm bảo rằng nó sạch sẽ, khô và không bị ô nhiễm
2 Trộn methanol và nước khử ion hóa trong tỷ lệ 7: 3 để chuẩn bị dung dịch chiết xuất mẫu
3 Lấy 2g mẫu ngô nghiền nát và đặt nó trong một ống ly tâm 50ml. Thêm 5ml dung dịch chiết xuất mẫu và lắc trong 5 phút ở nhiệt độ phòng 4000 vòng / phút trong 10 phút. Sau đó,lấy 0.5ml chất siêu sinh và thêm 0,5ml nước phi ion hóa. trộn tốt
Lấy các chất phản ứng cần thiết ra khỏi môi trường lạnh 4 °C, để chúng cân bằng ở nhiệt độ phòng trong 30 phút và lắc kỹ.và pha loãng 20 lần dung dịch giặt tập trung với nước phi ion hóa để làm cho dung dịch giặt hoạt động.
5 Đếm số các vi lỗ tương ứng của mẫu và tiêu chuẩn theo trình tự, tạo 2 hố song song cho mỗi mẫu và tiêu chuẩn và ghi lại vị trí của các hố tiêu chuẩn và hố lấy mẫu.Thêm 50 μ l/đống tiêu chuẩn hoặc mẫu vào các vi lỗ tương ứng, sau đó thêm 50 μ l / giếng của enzyme marker, và sau đó thêm 50 μ l / giếng của giải pháp hoạt động kháng thể.Phản ứng ở 25 °C trong 30 phút.
Loại bỏ màng nắp, lắc dịch bên trong lỗ và rửa kỹ 5 lần với 250 μ l chất tẩy rửa hoạt động mỗi lỗ, với khoảng thời gian 30 giây giữa mỗi lần rửa.Sử dụng giấy hấp thụ để khô
Thêm dung dịch chất nền A (50 μ l) vào mỗi giếng, tiếp theo là dung dịch chất nền B (50 μ l).
Thêm 50 μ l dung dịch kết thúc vào mỗi giếng, lắc nhẹ nhàng và trộn tốt để kết thúc phản ứng.
9 Đo giá trị hấp thụ của mỗi giếng ở 450nm bằng cách sử dụng máy phân tích aflatoxin (được khuyến cáo hai bước sóng 450/630nm).Việc đo lường phải được hoàn thành trong vòng 10 phút sau khi kết thúc phản ứng
10 Thiết bị kết thúc đo lường và tự động cung cấp kết quả
Kết quả thử nghiệm
Sau khi thử nghiệm, hàm lượng aflatoxin của mẫu là khoảng 0,19ug / kg, đáp ứng tiêu chuẩn an toàn thực phẩm quốc gia GB 2761-2017 về giới hạn độc tố nấm trong thực phẩm.