Máy kiểm tra mycotoxin ELISA Độ dài sóng 400 - 999nm Aflatoxin B1 Detection ST-2000A

ST-2000A Máy kiểm tra Mycotoxin

Máy phân tích mycotoxin ST-2000A là một thiết bị phân tích cần thiết cho xét nghiệm aflatoxin và xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme. Nguyên lý của xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme pha rắn (ELISA), tức là xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme (ELISA), bao gồm thiết bị này và bộ kit B1, có thể được sử dụng để xác định hàm lượng aflatoxin B1 và các mycotoxin khác trong mẫu một cách giới hạn và định lượng (nếu được trang bị các bộ kit khác, các độc tố khác có thể được phát hiện). Nó được sử dụng rộng rãi trong việc phát hiện aflatoxin B1 và các mycotoxin khác trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi, dầu, các sản phẩm từ sữa, thuốc, đồ uống, rượu và các sản phẩm khác.

Đặc điểm hiệu suất:

1. Thao tác hiển thị: màn hình LCD màu, bảng phân phối video, hiển thị thông tin toàn bộ bảng, thao tác màn hình cảm ứng

2. Chức năng tấm rung: Tốc độ tấm rung cấp 3, thời gian có thể điều chỉnh từ 0-255 giây

3. Trạm làm việc: phần mềm đánh dấu enzyme chuyên nghiệp, có thể lưu trữ 500 nhóm chương trình, 100000 kết quả mẫu và cung cấp các chế độ tính toán phong phú như độ hấp thụ, phương trình tuyến tính, phương trình logarit, phương trình bậc hai, phương trình bậc ba, phương trình logarit phần trăm độ hấp thụ-nồng độ, hàm spline, tỷ lệ ức chế, v.v.

Thông số kỹ thuật:

1 Nguyên lý và ứng dụng

Bộ kit này sử dụng phương pháp ELISA cạnh tranh gián tiếp để phát hiện aflatoxin B1 (AFB1) trong ngũ cốc, thức ăn chăn nuôi và các mẫu khác. Bộ kit bao gồm tấm đánh dấu enzyme được tráng sẵn kháng nguyên liên hợp, chất đánh dấu enzyme horseradish, kháng thể, tiêu chuẩn và các thuốc thử phù hợp khác. Trong quá trình xét nghiệm, thêm dung dịch tiêu chuẩn hoặc mẫu, aflatoxin B1 trong mẫu và tấm enzyme được tráng sẵn kháng nguyên liên hợp sẽ cạnh tranh với kháng thể kháng aflatoxin B1. Sau khi thêm chất đánh dấu enzyme, sử dụng chất nền TMB để phát triển màu. Giá trị độ hấp thụ của mẫu có tương quan nghịch với hàm lượng aflatoxin B1 có trong mẫu. Lượng aflatoxin B1 còn lại trong mẫu có thể thu được bằng cách so sánh với đường cong tiêu chuẩn.

2 Chỉ số kỹ thuật

2.1 Độ nhạy của bộ kit: 0.03ppb (ng/ml)

2.2 Chế độ phản ứng: 25 ℃, 30 phút ~ 15 phút

2.3 Giới hạn phát hiện dưới:

Ngũ cốc...................................................... 0.15ppb

Thức ăn hỗn hợp.......................................... 0.3 ppb

Dầu ăn, đậu phộng.................................... 0.6ppb

Nước tương, lúa mì và các loại thức ăn khác.............................. 0.3 ppb

Bia.......................................... 0.3 ppb

Rượu, nước tương, giấm.................................... 0.15ppb

2.4 Tỷ lệ phản ứng chéo:

Aflatoxin B1 100%

2.5 Tỷ lệ thu hồi mẫu:

Ngũ cốc và thức ăn hỗn hợp.............................. 85% ± 15%

Đậu phộng.................................... 82 ± 15%

Dầu ăn.................................... 85 ± 15%

Nước tương, lúa mì và các loại thức ăn khác.............................. 83 ± 15%

Bia.................................... 84 ± 15%

Rượu, nước tương, giấm............ 87 ± 15%

3 Thành phần bộ kit

Tấm đánh dấu enzyme.................................... 96 giếng

Dung dịch tiêu chuẩn (nắp đen): mỗi loại 1ml

0ppb,0.03ppb,0.06ppb,0.12ppb,0.24ppb,0.48ppb

Dung dịch tiêu chuẩn cao: 100ppb.............................. 1ml

Chất đánh dấu enzyme (nắp đỏ).............................. 5.5ml

Dung dịch kháng thể làm việc (nắp xanh).............................. 5.5ml

Dung dịch chất nền A (nắp trắng).............................. 6ml

Dung dịch chất nền B (nắp đen).............................. 6ml

Dung dịch kết thúc (nắp vàng).............................. 6ml

Dung dịch rửa cô đặc 20X (nắp trắng)..................... 40ml

Hướng dẫn sử dụng.....................1 bản

4 Thiết bị và thuốc thử cần thiết

4.1 Thiết bị: máy kiểm tra aflatoxin, máy in, máy đồng hóa, thiết bị làm khô bằng nitơ, máy lắc, máy ly tâm, pipet chia độ, cân (độ nhạy 0.01g)

4.2 Pipet vi lượng: đơn kênh 20 µ l-200 µ l, 100 µ l-1000 µ l, đa kênh 300 µ l

4.3 Thuốc thử: methanol, n-hexane, trichloromethane hoặc dichloromethane

5 Tiền xử lý mẫu

5.1 Hướng dẫn trước khi xử lý mẫu:

Thiết bị thí nghiệm phải sạch và sử dụng đầu hút dùng một lần để tránh nhiễm bẩn và ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm.

5.2 Chuẩn bị dung dịch:

Dung dịch 1: chiết xuất mẫu

70% methanol, tức là V methanol: V nước cất=7:3.

5.3 Các bước tiền xử lý mẫu:

5.3.1 Phương pháp xử lý ngũ cốc

1) Cân 2g mẫu nghiền vào ống ly tâm 50ml, thêm 5ml dung dịch chiết xuất mẫu, lắc trong 5 phút, ly tâm ở tốc độ 4000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng/10 phút;

2) Lấy 0.5ml dịch nổi, thêm 0.5ml nước cất và trộn đều;

3) Lấy 50 μ L để phân tích.

Tỷ lệ pha loãng mẫu: 5 Giới hạn phát hiện dưới: 0.15ppb

5.3.2 Phương pháp xử lý các mẫu có khả năng hấp thụ nước mạnh như vỏ ngô và cám lúa mì

1) Cân 2g mẫu nghiền vào ống ly tâm 50ml, thêm 20ml dung dịch chiết xuất mẫu, lắc trong 5 phút, ly tâm ở tốc độ 4000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng/10 phút;

2) Lấy 0.5ml dịch nổi, thêm 0.5ml nước cất và trộn đều; (Đối với mẫu có hàm lượng độc tố cực cao, có thể pha loãng bằng 35% methanol rồi thử nghiệm. Ví dụ, lấy 0.1ml dung dịch hỗn hợp trong 2) và 0.9ml 35% methanol để trộn. Tỷ lệ pha loãng mẫu cuối cùng là 200, và giới hạn phát hiện là 6ppb.)

3) Lấy 50 μ L để phân tích.

Tỷ lệ pha loãng mẫu: 20 Giới hạn phát hiện dưới: 0.6ppb

Lưu ý: Do sự phân bố không đồng đều của độc tố trong mẫu, cần lấy mẫu từ nhiều điểm và trộn đều trước khi lấy 2g để thử nghiệm.

5.3.3 Phương pháp xử lý thức ăn hỗn hợp

1) Cân 2g mẫu nghiền vào ống ly tâm 50ml, thêm 10ml dung dịch chiết xuất mẫu, lắc trong 5 phút, ly tâm ở tốc độ 4000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng/10 phút;

2) Lấy 0.5ml dịch nổi, thêm 0.5ml nước cất và trộn đều;

3) Lấy 50 μ L để phân tích.

Tỷ lệ pha loãng mẫu: 10 Giới hạn phát hiện dưới: 0.3ppb

5.3.4 Phương pháp xử lý thức ăn cho dầu ăn, đậu phộng và thực phẩm giàu chất béo

1) Cân 2g mẫu nghiền vào ống ly tâm 50ml, thêm 8ml n-hexane và 10ml dung dịch chiết xuất mẫu, lắc trong 5 phút, ly tâm ở tốc độ 4000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng/10 phút;

2) Loại bỏ lớp chất lỏng phía trên, lấy 0.5ml chất lỏng phía dưới và thêm 0.5ml nước cất, trộn đều, sau đó lấy 0.5ml dung dịch hỗn hợp và thêm 0.5ml 35% methanol, lắc trong 30 giây;

3) Lấy 50 μ L để phân tích.

Tỷ lệ pha loãng mẫu: 20 Giới hạn phát hiện dưới: 0.6ppb

5.3.5 Phương pháp xử lý thực phẩm hoặc gia vị như nước tương, lúa mì, bánh quy, bánh ngọt và thức ăn chăn nuôi như thức ăn cô đặc

1) Cân 2g mẫu nghiền vào ống ly tâm 50ml, thêm 10ml dung dịch chiết xuất mẫu, lắc trong 5 phút, ly tâm ở tốc độ 4000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng/10 phút;

2) Lấy 2ml dịch nổi, thêm 4ml trichloromethane (hoặc dichloromethane), lắc trong 5 phút, ly tâm ở tốc độ 4000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng/10 phút;

3) Chuyển lớp chất lỏng phía trên sang một vật chứa khác, giữ lại lớp chất lỏng phía dưới để dự phòng, thêm 4ml chloroform (hoặc dichloromethane) khác vào lớp chất lỏng phía trên, lắc và trộn đều trong 5 phút, và nhiệt độ phòng là 4000 vòng/phút/trung tâm ly tâm trong 10 phút;

4) Loại bỏ lớp chất lỏng phía trên, kết hợp hai lần lớp chất lỏng phía dưới và trộn đều;

5) Lấy 2ml chất lỏng phía dưới đã kết hợp và làm khô dưới dòng nitơ ở 50-60 ℃;

6) Thêm 0.5ml chiết xuất mẫu để hòa tan hoàn toàn chất khô, sau đó thêm 0.5ml nước cất và trộn;

7) Lấy 50 μ L để phân tích.

Tỷ lệ pha loãng mẫu: 10 Giới hạn phát hiện dưới: 0.3ppb

5.3.6 Phương pháp xử lý bia

1) Lắc đều bia (loại bỏ CO2), lấy 2ml mẫu bia, thêm 1ml nước cất, thêm 7ml methanol và lắc trong 5 phút;

2) Lấy 0.5ml dung dịch mẫu hỗn hợp và thêm 0.5ml nước cất để trộn đều;

3) Lấy 50 μ L để phân tích.

Tỷ lệ pha loãng mẫu: 10 Giới hạn phát hiện dưới: 0.3ppb

5.3.7 Phương pháp xử lý rượu, nước tương và giấm

1) Lấy 2ml mẫu, thêm 2ml nước cất, thêm 10ml trichloromethane (hoặc dichloromethane), lắc trong 5 phút, ly tâm ở tốc độ 4000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng/10 phút;

2) Lấy 1ml chất lỏng phía dưới và làm khô dưới dòng nitơ ở 50-60 ℃;

3) Thêm 0.5ml chiết xuất mẫu để hòa tan hoàn toàn chất khô, sau đó thêm 0.5ml nước cất và trộn đều;

5) Lấy 50 μ L để phân tích.

Tỷ lệ pha loãng mẫu: 5 Giới hạn phát hiện dưới: 0.15ppb

6 Các bước ELISA

Lấy thuốc thử cần thiết ra khỏi môi trường bảo quản lạnh 4 ℃ và để ở nhiệt độ phòng trong hơn 30 phút. Có thể có các tinh thể cần được phục hồi về nhiệt độ phòng để hòa tan hoàn toàn khi dung dịch rửa được bảo quản lạnh. Mỗi thuốc thử dạng lỏng phải được lắc trước khi sử dụng. Lấy số lượng tấm vi giếng và khung cần thiết, cho các tấm vi giếng chưa sử dụng vào túi tự niêm phong và bảo quản ở 2-8 ℃.

Trước khi làm thí nghiệm, dung dịch rửa cô đặc 20 lần được pha loãng thành dung dịch rửa làm việc bằng cách pha loãng 20 lần.

6.1 Đánh số: đánh số các giếng tương ứng của mẫu và tiêu chuẩn theo trình tự, làm hai giếng song song cho mỗi mẫu và tiêu chuẩn, và ghi lại vị trí của giếng tiêu chuẩn và giếng mẫu.

6.2 Phản ứng thêm mẫu: thêm 50 µ l/giếng tiêu chuẩn hoặc mẫu vào các giếng tương ứng, sau đó thêm 50 µ l/giếng chất đánh dấu enzyme, sau đó thêm 50 µ l/giếng dung dịch kháng thể làm việc, niêm phong tấm bằng màng phủ, lắc nhẹ trong 5 giây, trộn và phản ứng ở 25 ℃ trong 30 phút.

6.3 Rửa: Cẩn thận gỡ màng phủ, làm khô chất lỏng trong giếng, rửa sạch giếng bằng dung dịch rửa làm việc 250 µ l/giếng trong 5 lần, với khoảng thời gian 30 giây, và thấm khô bằng giấy thấm (các bọt khí không được loại bỏ sau khi thấm có thể được chọc bằng đầu súng sạch).

6.4 Phát triển màu: thêm 50 µ l dung dịch chất nền A và 50 µ l dung dịch chất nền B vào mỗi giếng, lắc nhẹ trong 5 giây và trộn đều, và phát triển màu trong tối ở 25 ℃ trong 15 phút.

6.5 Kết thúc: thêm 50 µ l dung dịch kết thúc vào mỗi giếng, lắc nhẹ và trộn đều để kết thúc phản ứng.

6.6 Đo giá trị độ hấp thụ: sử dụng máy kiểm tra aflatoxin để đo giá trị độ hấp thụ của mỗi giếng ở bước sóng 450 nm (khuyến nghị sử dụng bước sóng kép 450/630 nm). Việc xác định phải hoàn thành trong vòng 10 phút sau khi kết thúc phản ứng.

6.7 Máy kiểm tra aflatoxin tự động ST-2000A tự động hoàn thành việc xác định và tự động tạo ra kết quả.